轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法有哪些？

轉(zhuǎn)基因食品是對食品組成物質(zhì)的一種基因加工。轉(zhuǎn)基因食品是利用一種生物技術(shù)將某種生物的基因轉(zhuǎn)移到另外一種生物的基因中去，使食品的營養(yǎng)價值更豐富，味道更鮮美。但人們對轉(zhuǎn)基因食品的顧慮仍存在，因此對轉(zhuǎn)基因食品的檢測十分有必要，那你知道轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法有哪些嗎？

目前對轉(zhuǎn)基因食品的檢測按原理主要分為針對外源蛋白質(zhì)和針對外源DNA兩種鑒定技術(shù)。

一、外源蛋白質(zhì)的測定

即從蛋白質(zhì)水平對轉(zhuǎn)基因食品進行檢測，實際應(yīng)用中主要采用的是免疫學(xué)檢測法，即Western雜交、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和試紙條法。免疫學(xué)檢測法可以檢測具有抗原性的蛋白質(zhì)類表達產(chǎn)物的存在，它是通過抗原抗體特異反應(yīng)來實現(xiàn)的。

Western雜交

Western雜交是將蛋白質(zhì)電泳、印跡、免疫測定融為一體的特異蛋白質(zhì)檢測方法，具有很高的靈敏性，可以從植物細胞總蛋白中檢測出50ng的特異蛋白。Western雜交檢測的關(guān)鍵是抗體的制備。

酶聯(lián)免疫吸附法

ELISA建立了固-液抗原抗體反應(yīng)體系，并采用酶標記，抗體與抗原的結(jié)合通過酶反應(yīng)來檢測。由于酶的放大作用，使測定的靈敏度極高，可檢測出1pg的目標物，同時酶反應(yīng)還具有很強的特異性。它的檢測原理和過程基本與Western雜交檢測相似。

試紙條法

此法是在最近15年發(fā)展起來的，之前主要用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。與ELISA相似，這種測定方法是將特異的抗體交聯(lián)到試紙條上和有顏色的物質(zhì)上，當紙上抗體和特異抗原結(jié)合后，再和帶有顏色的特異抗體進行反應(yīng)，就形成了帶有顏色的三明治結(jié)構(gòu)，并且固定在試紙條上，如果沒有抗原，則沒有顏色。因此整個操作相對簡單一些。目前市場上也出現(xiàn)了一些此類測試的試紙盒。

外源蛋白質(zhì)檢測法快速，具有一定的靈敏度，也能進行半定量，尤其是試紙條法，不需要特殊的儀器設(shè)備，適用于現(xiàn)場檢驗或初篩。但外源蛋白質(zhì)檢測法有三方面的局限性：(1)由于抗原抗體反應(yīng)的專一性，每種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品都要開發(fā)和建立專門的檢測試劑和方法，而轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品種類繁多，要建立所有轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的蛋白質(zhì)檢測法工作量很大;(2)對于加工過的轉(zhuǎn)基因食品，其蛋白質(zhì)很容易被破壞，從而影響檢測結(jié)果的準確行;(3)有些插入基因還具有表達部位特異性，這些金銀的表達并不像DNA那樣存在轉(zhuǎn)基因作物的任何部位，甚至有的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的插入基因根本不表達或表達量很低。這些都會影響檢測結(jié)果。

二、外源DNA的檢測　　

目前對于外源基因的檢測主要是通過對轉(zhuǎn)入的外源基因進行PCR擴增，然后進行紫外或熒光檢測。PCR技術(shù)全稱“聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)”，是一種在體外由引物引導(dǎo)的DNA聚合酶催化的聚合反應(yīng)，能在短時間內(nèi)準確地將目的序列大量復(fù)制。在轉(zhuǎn)基因食品檢測方面，主要是用于從DNA即基因水平來鑒定被測食品。由于它的快速、靈敏、費用低、檢測僅需微量的DNA并且可以同時檢測多個樣品，正成為這一領(lǐng)域日趨成熟的方法之一。

定性PCR

轉(zhuǎn)基因食品重組DNA的基本機構(gòu)包括啟動子、目的基因、終止子和標記基因。由于目的基因種類繁多，所以先用轉(zhuǎn)基因食品最常用的轉(zhuǎn)錄啟動子CaMV35S、轉(zhuǎn)錄終止子NOS及抗生素抗體基因NPTII三個序列來設(shè)計引物進行PCR反應(yīng)，對結(jié)果陽性者可再檢測目的基因。

定量PCR

PCR反應(yīng)具有高度特異性和敏感性，但對實驗技術(shù)的要求很高，其結(jié)果易受許多因素的干擾而產(chǎn)生誤差，一般PCR只用作轉(zhuǎn)基因食品的定性篩選檢測。針對所存在的問題，研究人員在實驗設(shè)計中引入內(nèi)部參照反應(yīng)，以消除檢測時的干擾，并與已知含量的序列GMO標準樣的PCR結(jié)果進行比較，從而可以半定量地檢測待測樣品的GMO含量。

近年來定量競爭PCR和實時熒光定量PCR都已用于轉(zhuǎn)基因食品的定量檢測。競爭性定量的基本原理是用人工設(shè)計的競爭模板以不同稀釋度與標本共同擴增，以競爭模板的稀釋度和結(jié)果做標準曲線，判斷標本中待測核酸的量。

實時熒光PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時檢測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量的方法。這種檢測方法采用獨特全封閉反應(yīng)，只須在加樣時打開一次蓋子，減少了污染，具有高度的靈敏性。

PCR-ELISA

這是一種將PCR的高效性與ELISA高特異性結(jié)合在一起的檢測方法，它利用地高辛或生物素等標記引物，將PCR擴增產(chǎn)物與固相板上特異的探針結(jié)合，再加入抗地高辛或生物素的酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物，最后使底物顯色，在酶標儀上讀取數(shù)值。利用PCR-ELISA法對轉(zhuǎn)基因大豆檢測，靈敏度比歐盟推薦的PCR方法高5-10倍。它快速方便，避免了有毒物質(zhì)EB的使用，適合大批量自動檢測。