如何檢測乳酸菌飲料中的乳酸菌含量？
2022-12-12
發布：國科檢測
我們平時喝的酸奶、乳酸菌飲料都含有個關鍵成分——乳酸菌。能從葡萄糖或乳糖的發酵過程中產生乳酸的有益菌，廣泛存在于人體的腸道中，大部分是具有改善腸道消化功能的作用。那你知道如何檢測乳酸菌飲料中的乳酸菌含量嗎？
如何檢測乳酸菌飲料中的乳酸菌含量？
一、樣本采集
檢樣主要為含乳酸菌活菌的飲料和微生態制劑，樣本應放入冰箱保存，心快檢驗。
二、檢驗方法（中華人民共和國國家標準 乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學檢驗GB／T 16347-1996）
乳酸菌菌總數的測定：乳酸菌菌落總數是指標樣在一定條件下培養后，所得1ml檢樣中所含乳酸菌菌落的總數。
（一）檢驗程序
乳酸菌菌落總數檢驗程序如下：
（二）培養基和試劑
改良TJA培養基（改良番茄汁瓊脂培養基）；改良MC培養基（modified Chalmers培養基）；0.1％亞甲藍牛乳培養基；6.5％氯化鈉肉湯參照；pH9.6葡萄糖肉湯；40％膽汁肉湯；淀粉水解培養基；精氨酸水解培養基；乳酸桿菌糖發酵管；七葉苷培養基；革蘭氏染色液；3％過氧化氫溶液；蛋白胨水、靛基質試劑；明膠培養基；硝酸鹽培養基、硝酸鹽試劑；生理鹽水：定量分裝于三角瓶和試管內滅菌。
（三）操作步驟
1．以無菌操作將經過充分搖勻的檢樣25ml（或25g）放入含有225ml滅菌生理鹽水的來菌廣口瓶內做成1：10的均勻稀釋液。
2．用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1m，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內（注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液）。
3．另取1ml滅菌吸管，按上述操作順序，作10倍增稀釋液，如此每遞增一次，即換用1支1ml滅菌吸管。
4．選擇2～3個以上適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。
5．稀釋液移入平皿后，應及時將冷至50℃的乳酸菌計數培養基（改良TJA或改良MC）注入平皿約15ml，并轉動平皿使混合均勻。同時將乳酸菌計數培養基傾入加有1ml稀釋液檢樣用的滅菌生理鹽水的滅菌平皿內作空白對照，以上整個操作自培養物加入培養皿開始至接種結束須在20min內完成。
6．待瓊脂凝固后，翻轉平板，置36℃±1℃溫箱內培養72h±3h取出，觀察乳酸菌菌特征，選取菌落數在30～300之間的平板進行計數。計算后，隨機挑取5個菌落數進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查并做過氧氫酶試驗。革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，無芽胞的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據證實為乳酸菌菌落計算出皿內的乳酸菌數，然后乘其稀釋倍數即得每亳升樣品中乳酸菌數。例如，檢樣10－4的稀釋液在改良TJA瓊脂平板上，生成的可疑菌落為35個，取5個鑒定，證實的乳酸菌的4個，則1ml檢樣中乳酸菌數為：
35×4／5×104＝2.8×105
7．乳酸菌在改良TJA和改良MC培養基上菌落生長形態特征。
（四）乳酸菌的鑒定
對上述分離到的乳酸菌需進行菌種鑒定時，則作以下試驗。
1．菌種制備 自平板上挑取菌落，接種于改良TJA或改良MC瓊脂斜面，于36℃±1℃，24～48h培養，刮取菌苔，分別進行下列試驗。
2．乳酸桿菌鑒定試驗 極少見還原硝酸鹽，不液化明膠，不產生靛基質和硫化氫。
3．常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應。
4．產酸乳的鏈球菌的鑒別試驗。
